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        核酸提取純化方法

             核酸提取與純化是分子生物學試驗的基礎,核酸純化方法是影響提取核酸質量高低的最重要因素,也是下游分子生物學試驗成敗的關鍵。目前常見的核酸純化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高鹽沉淀蛋白質/醇沉淀方法、離心柱法和生物磁珠法,這幾種方法各有其優(yōu)勢和劣勢。
        一、PC抽提法
        PC 抽提是去除蛋白質有效的手段,但超過了該飽和度,裂解體系中的蛋白質不會被一次去除,必須靠多次抽提,方可徹底去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質難以徹底去除,以及基因組DNA 會斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。
        PC 抽提的另外一個用途是,利用酸性酚可以部分去除DNA 的特點,在RNA 抽提時獲得DNA 殘留極少的RNA。不過有一點要提醒的是,某些植物樣品,在去除某些雜質之前,是不能使用PC 抽提的,否則核酸必定降解。PC抽提最大的優(yōu)勢是成本低廉,對實驗條件要求較低,對于經費緊張的實驗室較為實用。

        二、高鹽沉淀法
        高鹽沉淀蛋白質/醇沉淀方法,同樣也是一個非常不錯的方法。與PC 抽提方法相比,除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點外,該方法幾乎克服了PC 抽提的所有缺點。更快、更輕松的去除蛋白質所可以用于大規(guī)模抽提,但其不足之處是純度(蛋白質殘留) 不夠穩(wěn)定,蛋白質的沉淀效率在4℃會更好一些。

        三、離心柱法
        離心柱純化法,是目前試劑盒提取廣泛應用的方法。其最大特點是受人為操作因素影響小,純度的穩(wěn)定性很高(雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進入另外一個離心管中,與含有核酸的柱子完全是分開的,所以洗滌更徹底。其致命弱點是樣品過量,提取效率較低,且需要反復離心,操作復雜,成本也較高。

        四、生物磁珠法
        生物磁珠法是將純化介質包被在納米級生物磁珠表面,通過介質對核酸的吸附,在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動,從而達到固液分離純化的作用。

        本周問答:
        核酸提取純化過程中,所用試劑各有其作用。在核酸提取純化過程中,使用蛋白酶K的作用是

        A、消化結合于核酸的蛋白質

        B、沉淀核酸

        C、消化核酸

        D、調節(jié)緩沖液的pH

        E、使核酸變性

        F、穩(wěn)定核酸
         

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